有别于传统的化学合成方法获取小分子RNA，本公司的miRNA/siRNA/RNA aptamer试剂均为生物合成，即通过构建含目标产物片段的质粒-转化大肠杆菌-发酵-提取-纯化流程制备。制备技术由美国加州大学戴维斯分校（UC Davis，USA）喻爱民教授开发并授权，由广州南峰生物科技有限公司负责产品制备和经营销售。制备方法已获得专利，且相关研究已发表在Nucleic Acids Res等SCI期刊上，详见 “参考文献”。

一、产品特点介绍：

1、如图所示，本产品属嵌合RNAs（Chimeric RNAs），由目标miRNA/siRNA/RNA aptamer片段及经过优化的搭载目标片段的OnRS（optimal noncoding RNA scaffold，最优非编码RNA载体）两部分构成，后者又由tRNA和hsa-miR-34a的前体pre-miRNA-3a构成。

2、OnRS的功能：一方面用于在大肠杆菌中稳定高表达嵌合RNAs，有效降低试剂费用；另一方面，由于是通过生物合成，tRNA经过多种天然的核苷酸修饰，大大增加了嵌合RNAs的稳定性，
且相对于市场上人工修饰的miRNA mimics，嵌合RNAs在性能上更接近于内源RNAs分子，从而能更好地模拟内源RNAs分子的功能。

3、细胞实验和动物实验表明，嵌合RNAs以“前药”的方式发挥作用：（1）进入人类细胞后，目标片段被选择性地加工、释放为成熟的序列，发挥相应的生理功能，转染细胞后，产品转染量与目标信号强度在长达4天的时间内持续呈正相关性，表明嵌合RNAs在人类细胞中具有强稳定性且能有效发挥相应功能；（2）除了发挥目标RNAs片段的相应功能，嵌合RNAs不会对细胞内其他非相关miRNAs产生显著影响，从而确保特异性发挥目标RNAs片段功能。

4、建议使用本公司设计合成的阴性对照OnRS/Neg，Neg为长约20nt的scrambled RNA。

5、纯化方式： anion-exchange FPLC（fast protein liquid chromatography ）。产品纯度在85%以上。如OnRS/miR-124纯度＞99%，OnRS/GFP-siRNA纯度＞98%。

二、运输和保存

1、运输：产品以冻干粉的形式，常温运输。

2、长期保存：-80℃~-20℃，冻干粉有效期一年。

3、液体保存：用RNase-free H2O或灭菌ddH2O，配制成合适浓度的储存液，分装保存。

三、给药方式及用量

1、细胞实验。产品用量随细胞类型、研究目的而异。前期研究表明，5~100nM本产品可有效转染细胞人非小细胞肺癌A549细胞及人卵巢癌ES-2细胞。

2、动物实验。

（1）局部给药。局部给药是将RNAs药物分子通过注射﹑滴入﹑涂抹或喷雾等方式直接导进到一个特定的组织或器官中。适用于眼、耳、鼻腔、呼吸道、肺、皮肤（表皮、真皮和皮下组织）、膀胱、子宫腔等部位。局部给药的优势在于不需要转染载体，可直接作用于靶向器官或组织且相对全身给药在用药量上要少一些。

小鼠每次每个部位RNA给药量(小鼠一般体重约为15~25g)：0.05~0.50mg/kg

大鼠每次每个部位RNA给药量(大鼠一般体重约为150~250g)：0.1~1.0mg/kg

（2）全身给药。体内大部分器官组织，如心脏、肝、肾、肺、肿瘤组织等血流丰富的组织器官本身不适用于通过局部给药的方法将RNAs药物直接导入，因此往往采用静脉注射的方式进行全身给药。但由于血液中存有大量的核酸酶，能快速降解裸RNAs药物分子，从而降低疗效，这也是当前RNAs药物研发的一大瓶颈，而使用脂质体包裹或病毒作为载体又存在难以预测的潜在毒性。动物实验表明，静脉注射给药后，嵌合RNAs能在体内有效发挥目标RNAs片段的相应功能，证实其体内稳定性良好，在RNAs药物研发方面极具优势。

小鼠每次RNA给药量(小鼠一般体重约为15~25g)：0.5~5.0mg/kg

大鼠每次RNA给药量(大鼠一般体重约为150~250g)：1.0~10mg/kg

四、产品价格

★注：所有产品均需定制，客户可以提供已收录在标准数据库中的目标RNAs分子的信息，也可以定制自主设计核苷酸序列的目标RNAs分子。

五、参考文献

[1] Chen QX, Wang WP, Zeng S, Uroyama S, Yu AM. A general approach to high-yield biosynthesis of chimeric RNAs bearing various types of functional small RNAs for broad applications. Nucleic Acids Res, 43(7):3857-3869 (2015).

[2] Li MM, Wang WP, Wu WJ, Huang M, and Yu AM (2014) Rapid production of novel premicroRNA agent hsa-mir-27b in Escherichia coli using recombinant RNA technology for functional studies in mammalian cells. Drug MetabDispos 42:1791–1795.

[3] Ponchon,L., Beauvais,G., Nonin-Lecomte,S. and Dardel,F. (2009) A generic protocol for the expression and purifcation of recombinant RNA in Escherichia coli using a tRNA scaffold. Nat. Protoc., 4,947–959.

[4] Li MM, Addepalli B, Tu MJ, Chen QX, Wang WP, Limbach PA, LaSalle JM, Zeng S, Huang M, Yu AM. Chimeric miR-1291 biosynthesized efficiently in E. coli is effective to reduce target gene expression in human carcinoma cells and improve chemosensitivity. Drug MetabDispos. 43(7):1129-1136 (2015).

[5] Taucher M and Breuker K (2010) Top-down mass spectrometry for sequencing of larger (up to 61 nt) RNA by CAD and EDD. J Am Soc Mass Spectrom 21:918–929.

[6] Wei-Peng Wang etc., Bioengineering Novel Chimeric microRNA-34a for Prodrug Cancer Therapy: High-Yield Expression and Purification, and Structural and Functional Characterization. J Pharmacol Exp Ther 354:131-14(2015).

[7] Hybrid tRNA_pre-miRNA molecules and methods of use. WO/2015/183667A1.